Descripción
El azul brillante de Coomassie R (CBR) es un colorante orgánico utilizado para teñir proteínas en geles de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). Es un derivado del azul de metileno y se conoce como un tinte de unión reversible. Es altamente sensible y específico para proteínas, y se ha utilizado ampliamente en la investigación biológica y bioquímica.
AZUL BRILLANTE DE COOMASIE R
¿Qué es el CBR?
El CBR es un colorante anfotérico que se une a las proteínas a través de interacciones electrostáticas e hidrofóbicas. El tinte tiene un grupo metileno azul que se une a los residuos básicos de las proteínas, como la arginina, la lisina y la histidina, así como también a los residuos hidrofóbicos, como la fenilalanina y la tirosina.
Cuando se agrega CBR a una solución de proteínas, el tinte se une a las proteínas y forma un complejo coloreado. La cantidad de tinte que se une a la proteína depende de la cantidad de proteína presente en la muestra, lo que permite la cuantificación de proteínas.
¿Para qué sirve el CBR?
El CBR se utiliza principalmente para teñir proteínas en geles de electroforesis en gel de poliacrilamida (PAGE). La tinción de proteínas es un paso importante en la separación y la identificación de proteínas en una muestra compleja. El CBR es altamente sensible y específico para proteínas, lo que lo convierte en una herramienta valiosa en la biología molecular y la bioquímica.
Además de la tinción de proteínas, el CBR también se utiliza en la identificación de proteínas en geles de proteínas mediante el uso de espectrometría de masas. Las bandas de proteínas teñidas con CBR se pueden cortar del gel, digerir con enzimas proteolíticas y analizar por espectrometría de masas para identificar las proteínas.
¿Cuáles son las características del CBR?
- Sensibilidad: El CBR es altamente sensible y puede detectar cantidades tan bajas como 1 µg de proteína.
- Especificidad: El CBR se une específicamente a las proteínas y no a otros compuestos en la muestra.
- Reversibilidad: El CBR es un tinte de unión reversible, lo que significa que se puede eliminar de las proteínas después de la tinción y las proteínas se pueden recuperar para su posterior análisis.
- Estabilidad: El CBR es un tinte estable y puede almacenarse durante largos períodos de tiempo sin perder su capacidad de unirse a las proteinas.
- Compatibilidad: El CBR es compatible con una amplia gama de buffer y soluciones de tinción, lo que lo hace fácil de usar en experimentos de laboratorio.
- Rango de tinción: El CBR tiene un amplio rango de tinción y puede detectar proteínas de diferentes tamaños y pesos moleculares.
- Color intenso: El CBR produce un color intenso y uniforme que permite la visualización clara de las proteínas en un gel de electroforesis.¿Cuáles son los métodos de tinción con CBR?
Existen dos métodos comunes de tinción con CBR: tinción en gel y tinción post-transferencia.
Tinción en gel: En este método, el CBR se agrega a la solución de tinción antes de la electroforesis. Después de la electroforesis, se lava el gel con una solución de fijación para fijar las proteínas en el gel y luego se tiñe con CBR. Las proteínas se tiñen en el gel y se pueden visualizar directamente en el gel de electroforesis.
Tinción post-transferencia: En este método, las proteínas se transfieren desde el gel de electroforesis a una membrana de transferencia después de la electroforesis. La membrana se bloquea con una solución de bloqueo y luego se tiñe con CBR. Las proteínas se tiñen en la membrana y se pueden visualizar en la membrana de transferencia.
